La enfermedad de Charcot-Marie-Tooth (CMT) es una neuropatía hereditara periférica motora y sensorial. La enfermedad se divide en neuropatías desmielinizantes (CMT1) y axonales (CMT2). En este trabajo, se han estudiado los cambios de comportamiento, celulares y moleculares en mutantes de genes asociados al CMT2 en el nematodo Caenorhabditis elegans (lin-41 / TRIM2, dyn-1 / DMN2, unc -116 / KIF5A, fzo-1 / MFN2, osm-9 / TRPV4, cua-1 / ATP7A, hsp-25 / HSPB1, hint-1 / HINT1, nep-2 / MME). En ensayos de actividad natatoria se ha observado una disminución de la actividad locomotora en dichos mutantes.
Materiales y Métodos
Se registró la actividad natatoria de 30-50 gusanos por pocillo. La medición se realizó durante tres horas utilizando el equipo de detección automatizada WMicrotracker. Se obtuvieron poblaciones sincronizadas de larvas L1 a partir de adultos llenos de huevos. Las larvas L1 se colocaron en placas con bacteria y se dejaron crecer hasta que alcanzaron la edad adulta. Se separaron manualmente los gusanos adultos de su progenie hasta que alcanzaron la etapa adulta de 3 días (A3) para los experimentos de WMicrotracker. La separación se logró lavando la placa que contenía gusanos adultos y progenies en un tubo y dejando que los gusanos adultos sedimenten por gravedad. Los gusanos A3 sincronizados se colocaron en placas de 96 pocillos (al menos 6 pocillos por grupo/genotipo por experimento).
Resultados
A partir de los datos obtenidos con WMicrotracker, se observó que las poblaciones de la cepa salvaje comenzaron con un recuento de motilidad de aproximadamente 420 cuentas de actividad, y fue decayendo lentamente hasta alcanzar una meseta de alrededor de 330 cuentas durante la hora final de análisis (Fig. 2A-C). La actividad promedio de la cepa salvaje durante los experimentos de 3 horas fue de 365 cuentas (Fig. 2D). En contraste, para los mutantes dyn-1 (ky51) como unc-116 (e2310) se registraron recuentos de motilidad por debajo de 200 cuentas (Fig. 2A, B, D). Las poblaciones de animales lin-41 (ma104), fzo-1 (cjn020) y cua-1 (gk107) también mostraron actividad significativamente reducida, entre 220 y 330 cuentas a lo largo de los experimentos (Fig. 2A, B, D). Los gusanos que carecen de hsp-25 tuvieron una ligera reducción (~ 12%), pero estadísticamente significativa en la motilidad, mientras que la mutación de osm-9, hint-1 o nep-2 no tuvo ningún efecto sobre el movimiento (Fig. 2A-D). Estos ensayos automatizados podrían resultar altamente ventajosos para la búsqueda de drogas que puedan revertir los defectos de movimiento en estos animales.
PLoS One. 2020 Apr 15;15(4):e0231600. doi: 10.1371/journal.pone.0231600. eCollection 2020.
Soh MS, Cheng X, Vijayaraghavan T, Vernon A, Liu J, Neumann B.