Muchos fármacos que alteran las interacciones colinérgicas han sido utilizados para la caracterización de cepas mutantes del gusano C.elegans, así como también para el estudio de las vías de señalización de comportamientos específicos. . Ensayos realizados con las drogas aldicarb y levamisol han permitido grandes aportes para la comprensión de la neurobiología de C. elegans. Las drogas levamisol y aldicarb son de gran utilidad para distinguir defectos a nivel pre y post-sinápticos. En presencia de ambas drogas los nematodos se paralizan de manera progresiva. El levamisol actúa como agonista de la acetilcolina, produciendo hipercontracción y parálisis en la cepa salvaje. Por otro lado, el aldicarb inhibe la enzima acetilcolinesterasa, la cual hidroliza a la acetilcolina durante la sinapsis colinérgica. La acumulación de acetilcolina en el espacio presináptico produce sobre-estimulación de los músculos hacía la contracción produciendo finalmente la parálisis.
El sistema WMicrotracker ARENA permite cuantificar fácilmente el efecto y la cinética de los moduladores de canales de acetilcolina, así como otros canales neuronales implicados en el comportamiento. A continuación presentamos un ejemplo de su aplicación.
Cinetica de paralisis por levamisole en W6 con NGM
En este experimento podemos observar la cinética de paralisis al tratar a poblaciones de C.elegans con levamisol.
Metodología:
(1) Obtenga poblaciones sincronizadas de gusanos cultivados en NGM + OP50 a 20 ° C. (2) Recoja los gusanos de las placas con solución tampón. (3) Cuente el número de gusanos en un volumen de 10 ul y ajuste el volumen para obtener una concentración de [50 gusanos / 10ul]. (4) Transfiera 10 μl de la solución de gusanos a una placa multipocillo de 6wells, conteninedo NGM+Levamisole sin bacteria (nota: El levamisole debe ser adicionado al NGM al momento de preparar el medio de cultivo de las placas). (5) Registre la actividad de la placa con gusanos usando Wmicrotracker ARENA durante 2h (6) Genere el informe de datos usando el software de análisis y grafique usando MSExcel.