18 noviembre, 2017
En este post pretendemos dar un ejemplo de protocolo para realizar experimentos de toxicidad en C.elegans.
Pasos para colectar los gusanos:
- Lavar de una placa de agar gusanos sincronizados en L4 o adultos con solución tampón o agua.
- Generar una suspensión de 50 gusanos / 100 ul de medio. El volumen total a preparar dependerá del diseño del ensayo (número de pocillos a usar).
- Colocar en placa de 96 pocillos, 100 ul de la suspensión de gusanos por pocillo (50 gusanos por pocillo).
- Sellar la placa con parafilm y dejar reposar durante 45 min.
- Configurar los grupos experimentales (uno por concentración tóxica) en el software WMicrotracker.
- Colocar la placa en el WMicrotracker y registrar la actividad de tiempo cero (actividad basal) durante 30 minutos.
- Colocar 10 ul de solución tóxica (mínimo 4 concentraciones diferentes) y volver a sellar la placa. Utilizar al menos 4 pocillos por concentración (repeticiones técnicas).
- Colocar la placa en el WMicrotracker y registrar la actividad durante 120 minutos.
- Graficar la actividad en bloques de 30 minutos, actividad basal vs. concentración tóxica.
