biorxiv. 2016. Cold spring harbor laboratory. doi: https://doi.org/10.1101/046789
El nematodo modelo C.elegans es un sistema prometedor para investigar funciones no convencionales de la paracaspasa tipo 1, ya que carece de CARD-CC, Bcl10 y NF-κ B. El WormBase indica un papel importante para la paracaspasa tipo 1, con un fenotipo «letal o estéril» (tm289 vs tm321) en los nemátodos. Para investigar en detalle, se analizó la expectativa de vida de C.elegans silenciando mediante ensayos de ARN de interferencia a la paracaspasa F22D3.6. El gen fue silenciado a nivel sistémico (todos los tejidos excepto neuronas) en la cepa salvaje N2 y en una cepa hipersensible a ARN interferencia neuronal (TU3311).
Para evaluar si la inactivación del gen F22D3.6 mediante ARN de interferencia mediaba neurotoxicidad, se realizó un estudio de motilidad con el sistema WMicrotracker. Se utilizó una placa de 24 pocillos, con medio nutritivo de crecimiento en agar y para prevenir la progenie se utilizó FUdR (200 uM) . Se sembraron seis pocillos con las bacterias de ARNi control (vector vacío L4440), otros seis con la bacteria de ARNi para silenciar a F22D3.6. La cepa TU3311 se creció sobre la bacteria productora de ARN de interferencia hasta el estadio jóven adulto (día 0). Alrededor de 100 gusanos adultos fueron colocados por pocillo. Tres independientes réplicas biológicas se midieron durante un período de tiempo de 20 horas. Las señales detectadas por hora se dividieron por el número promedio de gusanos en cada pocilllo. La diferencia de motilidad se relativizó con el control.
Aunque el silenciamiento sistémico de F22D3.6 no mostró ningún efecto sobre la expectativa de vida del nematodo, el silenciamiento neuronal causó una ligera pero significativa reducción de la esperanza de vida (P <0,05, Figura 6 A, B). Este resultado da indicios del rol vital de esta paracaspasa homóloga en las neuronas C.elegans.
Sorprendentemente, el silenciamiento de la paracaspasa mediante ARN de interferencia en la cepa hipersensible neuronal provocó un aumento de la motilidad (Figura 6C). Este resultado destaca un rol importante para las funciones de paracaspasa tipo 1 independiente del complejo CARD-CC/Bcl10/MALT1 (CBM) e indican que investigaciones adicionales sobre el rol y la función de F22D3.6 en C.elegans podría ser muy interesante.
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