La hidatidosis y la cisticercosis son enfermedades tropicales desatendidas causadas por parásitos cestodos (familia Taeniidae). No solo hay una pequeña cantidad de antihelmínticos aprobados para el tratamiento de estas cestodiasis, sino que también algunos de ellos no son muy efectivos contra las etapas larvarias, por lo que es fundamental identificar nuevas dianas farmacológicas y sus compuestos asociados. Las enzimas de la familia histona desacetilasa (HDAC) son blancos farmacológicos validados en cáncer y otras enfermedades, que en los últimos años, han ido ganando relevancia para el desarrollo de nuevos tratamientos antiparasitarios potenciales. En este trabajo, se estudia el perfil antihelmíntico de un panel de inhibidores de HDAC desarrollados recientemente contra el modelo cestodo Mesocestoides vogae (M. corti).
PREPARACIÓN DE PARÁSITOS: Los estadios larvarios -tetratiridia (TTy) se mantuvieron en el laboratorio mediante infección intraperitoneal alterna de ratas hembra Wistar adultas (3 meses de edad) y ratones hembra Balb /c adultos (3 meses de edad). Las TTy se recolectaron de la cavidad peritoneal usando técnicas asépticas estándar y se lavaron tres veces con solución salina fosfato (PBS) estéril pH 7.2 con levofloxacina (20 μg / mL). Antes de ser empleados en los experimentos, las TTy se seleccionaron por tamaño utilizando mallas de poliéster de monofilamento de tamaño entre 150 a 250 μm y se incubaron durante 24 h en 5 mL de medio MvRPMI, un medio RPMI 1640 modificado sin rojo fenol suplementado a 37ºC bajo atmósfera de CO2 al 5%. COMPUESTOS: Las soluciones madre de los inhibidores de HDAC se prepararon a 10 mM en dimetilsulfóxido (DMSO) al 100% y se almacenaron a -20ºC hasta su uso. Los inhibidores de clase I-HDAC, entinostat, TH65 y TH92 se seleccionaron para una caracterización adicional basada en su potente efecto antihelmíntico, ya que fueron capaces de matar a todos las TTy a una concentración de 20 μM antes de los 9 días de tratamiento. Se evaluó ABZ a 20 µM como control positivo. ENSAYO DE MOTILIDAD DE M. Vogae TTy: El efecto de cada compuesto sobre la viabilidad del parásito se determinó mediante un ensayo de motilidad empleando el dispositivo WMicrotracker. Brevemente, se incubaron 5 TTy en microplacas de 96 pocillos en forma de U con 200 μL de medio MvRPMI por pocillo a 37ºC en una atmósfera de CO2 al 5%. Los parásitos pre-tratados con etanol al 70% durante 30 min se utilizaron como control positivo. Todos los ensayos de motilidad se realizaron con vehículo del fármaco DMSO a Cf 1% del fármaco al igual que los controles negativos. El efecto antihelmíntico dosis-respuesta se determinó para los inhibidores de HDAC seleccionados a los 6 días de incubación con tres réplicas biológicas independientes, cada una por cuadruplicado. La evaluación de la irreversibilidad del efecto antihelmíntico se determinó incubando TTy con los compuestos a sus respectivas concentraciones de IC90 durante 6 días; luego, se retiró el medio de cultivo y se lavaron la TTy suavemente cuatro veces en PBS (pH 7,2) a 37ºC. Finalmente, las TTy se incubaron durante 8 días adicionales en un medio de cultivo fresco sin los compuestos.
Las curvas de dosis-respuesta generadas para los compuestos entinostat, TH65, TH92 y ABZ revelaron un efecto dependiente de la concentración. Los valores de CI50 de estos inhibidores de HDAC fueron significativamente más bajos que los de ABZ (20.58 ± 0.38 μM), siendo el entinostat el más potente con una CI50 muy bajo (1.22 ± 0.07 μM, p <0.0001), seguido de TH92 (6.27 ± 0,58 µM, p <0,0001) y TH65 (11,45 ± 1,20 µM, p <0,0001), Tabla 1. Además, se evaluó la irreversibilidad del efecto antihelmíntico in vitro observado para estos compuestos. No se observó ningún aumento en la viabilidad del parásito después de que los compuestos se eliminaron del medio de cultivo. Además, la reducción de la viabilidad TTy de M. vogae alcanzó el 100% antes o a los 10 días de incubación (Fig. 4). Estos resultados indican que los efectos antihelmínticos de los compuestos persistieron luego del período de incubación y fueron irreversibles. La evaluación y caracterización de inhibidores de las enzimas HDAC ayudará a explorar las funciones de estas enzimas en los cestodos, que podrían permitir el desarrollo de nuevos cestocidas.
PLoS Negl Trop Dis. 2021 Mar 3;15(3):e0009226. doi: 10.1371/journal.pntd.0009226. eCollection 2021 Mar.
Hugo R Vaca, Ana M Celentano, María A Toscanini, Tino Heimburg, Ehab Ghazy, Patrik Zeyen, Alexander-Thomas Hauser, Guilherme Oliveira , María C Elissondo, Manfred Jung, Wolfgang Sippl, Federico Camicia, Mara Cecilia Rosenzvit.