El ácido valproico (VPA) es un fármaco antiepiléptico que actualmente se usa en enfermedades neurodegenerativas. Sin embargo, se requiere una dosis alta para obtener un efecto terapéutico. Ácidos grasos poliinsaturados de cadena larga, como omega 3 y omega 6, son complementos eficientes en tratamientos para enfermedades neurológicas. En base a esto, el objetivo principal de este trabajo fue obtener un complejo basado en la encapsulación de VPA en una emulsión nutracéutica (NE) de aceite / agua enriquecida con ácidos grasos poliinsaturados de cadena larga para administración oral. Además, la encapsulación de VPA podría reducir su dosis y aumentar su efecto terapéutico. Para estudiar su efecto, se utilizó al modelo de larvas de pez cebra de comportamiento epileptiforme inducido por el fármaco proconvulsivante pentilenotetrazol (PTZ).
Materiales y Métodos
La determinación del modelo de comportamiento de epilepsia (MEB- Model of epileptiform behavior) se estudió en larvas de 5dpf, por cambios en la actividad locomotora a diferentes concentraciones de PTZ (1.25, 2.5, 5 y 10 mM). La actividad se registró en placas de 96 pocillos, con el sistema WMicrotracker durante 15 minutos, luego de una incubación con el tratamiento de 10 minutos.
La evaluación del efecto anti-epiléptico con VPA se analizó sobre el modelo de MEB definido en el ensayo descripto anteriormente. A 1 dpf, se transfirieron tres embriones no eclosionados por pocillo (placa de 96 pocillos), conteniendo medio E3 y se incubaron a 28ºC. A 5 dpf, se probaron los siguientes tratamientos: (i) 25, 50 y 100 μM de VPA en NE-VPA, (ii) NE sin VPA, (iii) 25, 50 y 100 μM de VPA solo (iv) larvas no tratadas. Las larvas se incubaron con el tratamiento durante 1 hora a 28ºC. Después de la incubación, se añadieron 2,50 μl de PTZ (2.5 mM) para inducir el comportamiento epileptiforme. La actividad locomotora espontánea se midió luego de 10 minutos de exposición a PTZ. Se utilizaron 16 pocillos por tratamiento.
Resultados
El estudio del modelo de comportamiento de epilepsia (MEB) resultó dependiente de la concentración de PTZ. La concentración de fármaco más baja que indujo este comportamiento fue de 2.50 mM de PTZ (Figura 4). Por lo tanto, se utilizó esta concentración en los ensayos de evaluación de efecto anti-epiléptico con VPA como modelo MEB.
Durante la evaluación del efecto anti-epiléptico con VPA (Figura 5), los tratamientos con VPA mostraron pequeñas diferencias en el movimiento espontáneo con respecto al MEB. Por otro lado, los tratamientos con NE-VPA redujeron significativamente el comportamiento epileptiforme cuando se compararon con MEB. Este efecto se observó con claridad con NE-VPA a 100 μM. El tratamiento con NE también mostró una reducción del MEB. La reducción observada en el tratamiento NE-VPA fue mucho más significativo que el tratamiento con VPA solo.
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Journal of Pharmaceutical Investigation. 19 February 2017. DOI 10.1007/s40005-017-0316-x.
Daniela Agustina Feas, Daniela Edith Igartúa, María Natalia Calienni, Carolina Soledad Martinez, Marina Pifano, Nadia Silvia Chiaramoni, Silvia del Valle Alonso, María Jimena Prieto.