Durante los últimos 40 años o más, el estrés oxidativo ha ganado reconocimiento como un factor que contribuye al proceso de envejecimiento y en diversas fisio patologías asociadas al mismo. La investigación en C.elegans ha contribuido a comprender muchos factores involucrados en el envejecimiento, así como al descubrimiento de nuevas moléculas que ayudan a reducir los radicales libres y el daño por estrés oxidativo.
Utilizando WMicrotracker, es posible emular farmacológicamente el estrés oxidativo y medir el efecto de nuevas moléculas pequeñas, genes o compuestos naturales. A continuación presentamos un ejemplo de aplicación.
Modelo farmacológico del estrés oxidativo con Paraquat
En este experimento podemos observar la dinámica del modelo de estrés oxidativo y un pequeño efecto protector de la Vitamina C cuando los gusanos son expuestos a 10 mM de Paraquat.
Metodología:
(1) Obtener poblaciones sincronizadas de gusanos en placas NGM. (2) Recolectar a los gusanos de las placas, utilizando solución tampón. (3) dejar precipitar los gusano spor gravedad y reemplazar el buffer por medio axénico (4) Contar el número de gusanos en un volumen de 10 ul y ajustar el volumen para obtener una concentración de [5 gusanos / 10ul]. (5) Transferir 90 μl de la solución de gusanos a una microplaca de 96 pocillos empleando una pipeta multicanal. (6) Incubar con las potenciales moléculas antioxidantes. (Opcional:) Dejar que los gusanos reposen durante 1h y medir la actividad basal usando WMicrotracker. (7) Agregar Paraquat en concentración 10mM (8) Registrar la actividad de la placa con gusanos usando WMicrotracker por 48hs.
*Medio axénico: CeHR, CeMM, o 3PY + AB + FuDR