Las enfermedades tropicales desatendidas (ETD) son un grupo de 20 enfermedades consideradas como las infecciones más devastadoras en los países en desarrollo. Comprenden infecciones parasitarias y bacterianas crónicas, pero los agentes causantes más comunes de ETD son los parásitos helmintos. Holigarna caustica (Dennst.) Oken es utilizada por las tribus del noreste de la India como tratamiento de problemas intestinales. El presente estudio se realizó para investigar los principios activos de esta planta responsables de su actividad antihelmíntica, utilizando el fraccionamiento guiado por bioensayo. Se fraccionó un extracto etanólico de fruta H.caustica en columna de gel de sílica, seguido de HPLC, y se evaluó el efecto nematicida en el organismo modelo C.elegans.
Materiales y Métodos
El ensayo nematicida se realizó en microplaca de 96 pocillos (fondo plano). Las larvas en estadio L4 se recolectaron en buffer M9 y se ajustaron a aproximadamente 5000 larvas/ml. A los pocillos se les añadió 190ul de E.coli OP50 fresca (OD 600 = 0,5) y posteriormente se agregaron 10ul de suspensión de gusanos para obtener ~45 L4 de larvas por pocillo. Posteriormente, se añadió 1ul de la muestra a testear a cada pocillo (solución madre o dilución de la misma en DMSO a diferentes concentraciones); Como control de solvente se utilizó 1ul de DMSO. La actividad locomotora de los nematodos se registró durante 20hs a 20ºC utilizando el sistema WMicrotracker. El porcentaje de actividad promedio durante 20h en presencia del extracto, en comparación con el control DMSO (0,5%), se utilizó para estimar la actividad nematicida relativa. El levamisol (concentración final 50uM) se utilizó como control positivo. Después de 20h de incubación, se observaron todos los pocillos bajo un microscopio para distinguir los extractos con o sin actividad nematicida.
Resultados
Solo la fracción 3 (F-3), que eluyó con acetato de etilo/hexano, 50:50, tuvo un claro efecto nematicida (Figure 1). Por lo tanto, F-3 se estudió en HPLC para aislar los compuestos activos. La identificación tentativa por espectrometría de masa fue confirmada por RMN como ácido linoleico. El trabajo demuestra que el ácido linoleico es el principal compuesto responsable de las propiedades nematicidas de los extractos etanólicos de la fruta H.caustica, sugiriendo que los frutos de este árbol pueden ser una buena opción para desarrollar una preparación botánica antihelmíntica.
Biomolecules . 2020 Jul 14;10(7):E1043. doi: 10.3390/biom10071043.
Panda SK, Das R, Mai AH, De Borggraeve WM, Luyten W.