Los cestodos son uno de los agentes patógenos asociados a las enfermedades tropicales desatendidas, como la equinococosis y la cisticercosis, que representan un problema importante para la salud humana y animal. Los fármacos bencimidazoles y praziquantel (PZQ) son los únicos disponibles para el tratamiento y, por lo tanto, es importante identificar nuevos fármacos alternativos contra los parásitos cestodos. Las histonas desacetilasas (HDACs, por sus siglas en inglés) son dianas farmacológicas validadas para el tratamiento del cáncer y otras enfermedades, incluidas las enfermedades desatendidas. Sin embargo, el conocimiento de HDACs en cestodos es muy escaso. En este trabajo, se investigan las HDAC de cestodos como posibles blancos farmacológicos para desarrollar nuevas terapias contra las enfermedades desatendidas causadas por los cestodos. La tricostatina A (TSA), un inhibidor de la pan-HDAC, disminuye la viabilidad de M. corti, altera su tegumento y morfología y produce un incremento de la cantidad total de proteínas acetiladas, incluida la histona H4 acetilada.
Materiales y Métodos
La solución madre de TSA (Cell Signaling Technology, U.S.A.) y PZQ se prepararon en DMSO al 100% a 200x de la concentración máxima a usar. Con el fin de determinar el efecto del TSA (inhibidor de pan-HDAC) sobre M. corti TTy, este compuesto se probó en concentraciones en el rango de 1 μM a 20μM. Además, se testearon concentraciones de PZQ de 1 µM a 20 µM. Se utilizaron parásitos pre-tratados con etanol al 70% durante 30 minutos como control positivo. Todos los ensayos se realizaron con la misma cantidad de vehículo (concentración final de DMSO al 1%) y con su control negativo correspondiente (DMSO al 1%). El ensayo de motilidad se realizó utilizando el sistema de registro de actividad locomotora WMicrotracker. Se incubaron cinco parásitos TTy en 200 μl de medio de cultivo por pocillo en microplacas de 96 pocillos fondo en U (Greiner Bio-One, Alemania). El índice de motilidad se calculó como se describió anteriormente en Camicia et al. (2013, 2018).
Resultados
El ensayo de motilidad mostró que la TSA produjo una disminución de los índices de motilidad relativa en TTy tratados a los 6 días en comparación con TTy sin tratar (p <0,0001 para TSA 1 μM, 10 μM y 20 μM) (Fig. 7B). Estos resultados sugieren que los HDAC de los cestodos son funcionales y pueden desempeñar funciones importantes en la supervivencia y el desarrollo.
Fig. 7. Effect of Trichostatin A (TSA) on viability of Mesocestoides corti tetrathyridium (TTy) in culture. (B) the motility assay by worm tracker device at 6 days of M.corti TT y treatment. TTy were incubated in 200 μL of culture medium with 1, 10 and 20 μM of TSA or the vehicle (DMSO 1%). Three independent biological replicates were used. Error bars represent the SD. Praziquantel (PZQ) and ethanol 70% (EtOH 70%) were used as positive controls. In all panels, asterisks indicate those values showing differences with statistical significance compared to control according to ANOVA tests (***, p < 0.001; ****, p < 0.0001).
Int J Parasitol Drugs Drug Resist. 2019 Apr;9:120-132. doi: 10.1016/j.ijpddr.2019.02.003. Epub 2019 Feb 23.
Hugo R. Vaca, Ana M. Celentano, Natalia Macchiaroli, Laura Kamenetzky, Federico Camicia, Mara C. Rosenzvit