Los parásitos cestodos son platelmintos con la capacidad de parasitar casi todas las especies de vertebrados.
Varios de estos parásitos son agentes etiológicos de enfermedades desatendidas priorizadas por la OMS. Los gusanos planos parásitos Echinococcus granulosus sensu lato (s.l.) y Mesocestoides corti son tenias pertenecientes a la clase Cestoda, con E. granulosus s. l. perteneciente a Taeniidae y corti a la familia Mesocestoididae. Los Echinococcus son parásitos importantes en todo el mundo que afectan a la vida silvestre, a los animales domésticos y a las personas. Por otro lado, el parásito M. Corti es un modelo bien establecido para examinar los efectos de los medicamentos sobre la actividad neuromuscular.
Materiales Y Métodos
Previamente, miembros del mismo grupo de investigación demostraron que 5-HT induce la motilidad del protoscolex de E. granulosus [Ver Ref. Función de la serotonina en el sistema nervioso de Echinococcus spp. / The nervous and prenervous roles of serotonin in Echinococcus spp. (Camicia F., 2013)]. A pesar de contar con alguna evidencia sobre la acción de 5-HT sobre la movilidad de M. corti, no hay información sobre la cinética del mismo durante períodos de tiempo más largos (> 30 minutos). Por esta razón, en este trabajo se analizó el efecto de 5-HT en las larvas de M. corti.
Resultados
La evaluación del efecto de 5-HT sobre la motilidad de larvas tetratiridia de M. corti, se llevó a cabo utilizando un gusano por pocillo, número óptimo determinado empíricamente. El uso de más parásitos por pocillo no resultó en una señal mejorada. Las tetratiridia de M. corti se usaron frescas, inmediatamente después de que se abrieron los ratones. Se pipeteó una larva por pocillo en 100 μl de RPMI con glucosa (Gibco) en microplacas de 96 pocillos (fondo en U) y se incubó durante la noche a 37ºC en una atmósfera de CO2 al 5%. Al día siguiente, se realizó el registro de actividad basal durante 2 horas a 37°C en el WMicrotracker One. Después de las 2 horas iniciales, se añadieron 25 μl del mismo medio que contenía 5-HT a las concentraciones testeadas y se registró la motilidad de los parásitos en los 125 μl de medio resultantes durante otras 2 horas. En el caso de los controles, se añadieron 25 ul de medio de cultivo fresco antes de registrar la motilidad. A fin de evitar cualquier diferencia potencial entre los distintos individuos, la actividad registrada por pocillo se dividió por la actividad del mismo pocillo registrada durante la medición basal. Cada experimento se realizó utilizando 16 repeticiones técnicas por condición de tratamiento. Para las réplicas biológicas, se realizaron cuatro experimentos independientes, con larvas tetratiridia de diferentes ratones.
La presencia de serotonina produjo estimulación sobre las larvas de tetratiridia de M.corti por encima de los niveles basales (Fig. S6). La actividad de los canales de registro mostró una estimulación en la frecuencia del movimiento a altas dosis de 5-HT en comparación con la condición basal (Fig. S6A). La curva dosis-respuesta mostró un aumento significativo de la motilidad comenzando desde 100 μM de 5-HT (* p <0.05) hasta la concentración más alta probada de 2000 μM en un período de dos horas (*** p <0.001; Fig. S6B). Las curvas dosis-respuesta también se obtuvieron para diferentes intervalos de tiempo (30, 60, 90 y 120 minutos). Estos gráficos mostraron que la forma de la curva cambia con el tiempo (Fig. S6C). En las concentraciones más altas probadas (500 a 2000 μM), la motilidad relativa tiende a disminuir con el tiempo después de los primeros 30 minutos de incubación, perdiendo su importancia con respecto al control, lo que probablemente refleja un proceso de inactivación. En la dosis más baja (100 μM) la motilidad tiende a aumentar durante los primeros 90 minutos de incubación y luego también tiende a caer después de 120 minutos de incubación (Fig. S6C). Concentraciones similares de 5-HT (1000 μM; *** p <0.001) son necesarios para ver cambios significativos en la motilidad durante un período de 30 minutos mediante imágenes de video (Fig.S6D).
…………………………………………………………………………………………………………………………..
PLoS Negl Trop Dis. 2018 Feb 9;12(2):e0006267. doi: 10.1371/journal.pntd.0006267. eCollection 2018 Feb.
Camicia F, Celentano AM, Johns ME, Chan JD, Maldonado L, Vaca H, Di Siervi N, Kamentezky L, Gamo AM, Ortega-Gutierrez S, Martin-Fontecha M, Davio C, Marchant JS, Rosenzvit MC.