Mol Cell Endocrinol. 2012 Sep 25;361(1-2):232-40. doi: 10.1016/j.mce.2012.05.001. Epub 2012 May 11.
En Caenorhabditis elegans, pdfr-1 codifica tres receptores de la familia de receptores de secretina. Estos receptores de proteína G acoplado, son activados por tres neuropéptidos, factores de dispersión de pigmentos 1a, 1b y 2, los cuales son codificados por los genes pdf-1 y pdf-2. En el trabajo se aisló un alelo de PDF de pérdida de función (lst34) y se demuestra que el sistema de señalización PDF está involucrado en la locomoción y la puesta de huevos. Además, se demostró que el mutante pdfr-1 fenocopia el comportamiento locomotor defectuoso del mutante pdf-1, y que pdf-1 y pdf-2 se comportan de forma antagónica. Los tres variantes de procesamiento (splicing) del receptor PDF participan en la regulación del comportamiento locomotor.
Los ensayos de registro de actividad natatoria se realizaron con el sistema WMicrotracker One. Diez nemátodos en estadío L4 fueron colocados en una placa de 96 pocillos (fondo “U” o fondo plano) conteniendo por pocillo 100ul de solución tampón S Basal y 50uM de fluorodesoxiuridina (FUdR) para prevenir la reproducción. Después de 5 h de reposo, la actividad natatoria de los gusanos se midió durante 10 horas y el análisis se realizó en bloques de 30 minutos.
Leer más: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/22579613
En la figura 3A, se puede observar, como ambos mutantes pdf-1(tm1996) y pdfr-1(lst34) son significativamente menos activos comparado con la cepa salvaje. La actividad de los animales pdf-1(tm1996) podía ser restaurada al reintroducir múltiples copias del promotor y del gen pdf-1. Mientras que la sobreexpresión de pdf-1 utilizando la misma región genómica, no da lugar a cambios de comportamiento. La actividad natatoria del doble mutante pdf-1(tm1996);pdf-2(tm4393) se reduce significativamente a aproximadamente 2/3 del nivel de la cepa salvaje. Mutantes de pdf-2(tm4393) presentan niveles de actividad ligeramente elevados (103% en comparación con la cepa salvaje; P=0,06). El rescate de la cepa no muestra alteraciones fenotípicas aberrantes y la sobre expresión de pdf-2 resultó en un 12% menos de actividad. La actividad natatoria disminuida de pdfr-1(lst34) puede ser rescatada mediante la reintroducción de copias del gen pdfr-1 y su promotor. La sobre-expresión de este gen no parece influir en los niveles de actividad.
Con el fin de obtener información sobre dónde y qué variantes de splicing del receptor PDF están involucrados en la locomoción, se han generado cepas de rescate para las variantes de empalme. Estos expresan sólo una de las variantes de empalme del receptor en músculos de la pared del cuerpo (Phlh-1) o en neuronas (Punc-119). La expresión de Phlh-1::pdfr-1a, b o c no restableció la actividad (información no mostrada). La expresión pan-neuronal de pdfr-1a, b o c basta para restaurar la actividad de pdfr-1(lst34) a los niveles de la cepa salvaje.
Los experimentos mostrados en la Fig. 3A se realizaron en placas de 96 pocillos de fondo en “U” mientras que los experimento mostrado en la Fig. 3B se llevaron a cabo en placas de 96 pocillos fondo plano. La actividad natatoria de los gusanos en pocillos fondo en “U” es más elevada que en pocillos de fondo plano, ya que la forma en “U” hace que los gusanos se acumulen exactamente en el camino del láser que detecta la actividad. En pocillos de fondo plano, los nematodos se ubican de modo disperso e interfieren al láser con menor frecuencia. La actividad natatoria disminuida de pdfr-1(lst34), es por lo tanto, más pronunciada en pocillos de fondo plano.
Leer más: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/22579613